MT金属硫蛋白

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MT金属硫蛋白
金属硫蛋白的理化性质
一般来说，哺乳动物的MT分子量为6000～7000道尔顿，但去金属后即硫蛋白分子量为6 000道尔顿左右，而真核微生物的MT分子量范围较大，为2000～10000道尔顿，如从粗糙脉孢菌中分离出来的MT分子量为2500道尔顿左右，酵母菌中分离得到的MT分子量为8000～10000道尔顿。高等植物的MT的分子量为10000～13800道尔顿。MT的等电点pI一般在4左右，如哺乳动物MT的等电点在3.9～4.6之间，已发现的水生生物MT的等电点在3.5～6.0之间。使各种金属硫蛋白中50%的金属离子发生解离的pH分别为Zn-MT 3.5～4.5,Cd-MT 2.5～3.5，Cu-MT pH﹤1.0，但对植物中的MT来说，相应的pH要偏高些。MT的存在形式及稳定性与它所结合金属的种类，是否结合了金属及环境的pH密切相关。同样，MT的光吸收特征除了与它的氨基酸组成有关外，也与它所结合的金属种类密切相关。

金属硫蛋白的分类及分布
MT的结构在生物进化中高度保守，有四种异构体，MT-Ⅰ和MT-Ⅱ在大多数哺乳动物的内脏器官中广泛存在，尤以肝、肾细胞为主，而且参加其功能调节。MT-Ⅲ分布主要限于xxxx系统，主要分布于星性胶质细胞（集中于细胞体和突起中），其次为神经元细胞，也有报道称少量分布于生殖细胞、小肠、胃、肾和嗅觉皮质细胞中。MT-Ⅳ主要分布于皮肤、舌、消化道等器官的角质细胞和复层鳞状上皮细胞中。

MT粗制品的制备
1）称重：将前一夜放-4℃冰箱中解冻的试样拿出来用托盘天平称重，试样重量M，xx到0.1g； 　
2）搅碎：将试样用剪刀剪成碎片后，用捣碎机捣约30～50s，捣成匀浆； 　　
3）提取：加入相当于试样重量两倍体积的0.02MTris-HCl，用磁力搅拌器搅约半分钟； 　　4）变性：加入等体积氯仿：乙醇（0.08：1）变性除杂蛋白，搅拌约5分钟； 　　
5）离心：5000rmp、4℃离心25min，弃沉淀，取上清； 　　
6）热变性：75℃热变性3～5min除杂蛋白； 　　
7）过滤：用冰块速冷后用8层纱布过滤，取清液，静置约2h； 　　
8）离心：8000rmp、4℃离心25min，弃沉淀，取上清，得到匀浆液。 　　
9）层析、冻干：对匀浆液进行层析，然后收集富含MT的层析液进行冻干即得MT粗品。

金属硫蛋白的纯化方法
所谓纯化，也就是MT粗品（60%～90%）、MT精品（≥90%）以及纯品（≥95%）的形成过程。由报道的资料看，纯化方法大概是一致的，首先是根据MT-1和MT-2所带电荷不同的性质，进行离子交换将MT-1和MT-2分开，然后将收集MT-1和MT-2的层析液分别进行脱盐，{zh1}收集冻干、保存。 　　取匀浆液直接上Sephadex G-50柱（4.5×100cm）进行分离，以0.01mol/L Tris-HCl，pH8.6缓冲液洗脱。收集含MT组分层析液，再上预先用0.01mol/L Tris-HCl，pH8.6缓冲液平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow（3×70cm）柱进行离子交换层析，以Tris缓冲液进行直线梯度洗脱（A液：0.01mol/L Tris-HCl，pH8.6； B液：0.25mol/L Tris-HCl，pH8.6）。分别收集含MT-1和MT-2组分，冷冻干燥浓缩成体积15～20mL，再分别上预先用0.01mol/L碳酸铵平衡好的Sephadex G-25柱（1.6×120cm）进行脱盐。所得MT-1和MT-2冷冻干燥后保存于-20℃冰箱中。