冲洗: 材料自固定液中取出后,需立即冲洗,使其中所有的固定液全部除去,以妨碍染色 有些固定液,如10%福尔马林液、Bouin氏液固定的材料,若时间较短的话可不必冲洗。但时间过长亦需冲洗 3、脱水(37度恒温箱) 所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来,以利于有机溶剂的渗入,这一过程称为脱水。 脱水是否彻底,直接关系到组织是否能充分透明 脱水过度(原因是组织在纯酒精内时间过久,发生组织质地发生变化)容易造成组织发脆。造成组织发脆的原因还有加温(温度超过36℃)、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡
中二甲苯过多等等。一般我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关,而忽视了与低浓度的酒精关系,其实低浓度的酒精具有强大的穿透力,比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水,组织如果在低浓度酒精里充分脱水,在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水份,因此,仅需短时间就可完成,如果这时不缩短纯酒精的时间,便会引起组织发脆;如果脱水时加温,使用丙酮,还可引起组织收缩,并影响免疫组织化学的标记.
bao埋 (1)先将熔化的石蜡倾入bao埋生产模型中,再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的社团块,使社团块的{zd0}面或被特别指定处的社团面向下埋入熔蜡中;应将社团块平正地置放于bao埋生产模型底面的中央处;bao埋于同一蜡块内的多块细小社团应彼此靠近并位于同一最简单的面上;腔壁、皮肤和黏膜社团必须垂直bao埋(立埋)。 (2)将与社团块相关的病理号小条置入bao埋生产模型内熔蜡的一侧。 (3)待bao埋生产模型内的熔蜡表面凝固后,即将生产模型移入冷水中加速凝固。
(4)从bao埋生产模型中掏出凝固的bao埋蜡块(简称蜡快),用刀片去除社团块周围的过多石蜡(社团块周围保留1~2mm石蜡为宜)。将bao埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。 (5)将病理号小条安稳地烙贴在蜡块一侧(编号应清晰可见)。 (6)把修整好的蜡块烙贴在撑持器上,以备切片。 (7)使用bao埋机的要领按有关厂商的说明书操作。
固定液有多种,由一种化学物质组成者,称为单纯固定液;由多种化学物质组成者称为混合固定液。甲醛是最常用的一种单纯固定液,它对组织的主要作用是使组织硬化和防腐,对组织的穿透力强,固定均匀,组织收缩较少,能保持组织细胞的固有形态,染色后颜色清晰。但甲醛放置日久后,可自行分解,产生甲酸,使溶液呈酸性,影响细胞核着色。因此,在备用的甲醛溶液中加入某些小剂量的中和剂,使溶液呈中性(或弱碱性),称其为中性甲醛。中性甲醛属于混合固定液。用中性甲醛固定组织,更有利于保持组织的抗原性,有利于免疫组织化学标记物的检测,并可避免甲醛色素的形成,但不能保存组织内尿酸盐类结晶。乙醇也是一种单纯固定剂,有固定兼脱水的作用,但其渗透力较弱,固定速度较慢,易使组织变脆,另外,乙醇能使核蛋白质沉淀,核蛋白质被沉淀后能溶于水,不利于染色体的固定,是核着色不良,影响形态学的观察,故乙醇一般不作常规固定液应用。