实验室日常，从离心开始

今天是食品检验科的病毒检测，下面介绍是的是软质水果和生食蔬菜的诺如病毒的提取。

软质水果和生食蔬菜的病毒提取步骤：

1、将25g软质水果或生食蔬菜切成约2.5cmX2.5cmX2.5cm的小块（如水果或蔬菜小于该体积，可不切）。

2、将样品小块移至带有400 mL网状过滤袋的样品袋，加入40 mLTGBE溶液（软质水果样品，需加入30U A.niger果胶酶，或1140U A.aculeatus果胶酶），加入10μL过程控制病毒。

3、室温，60次/min，振荡20 min。酸性软质水果需在振荡过程中,每隔10 min检测pH，如pH低于9.0时，使用1 mol/L NaOH调pH至9.5,每调整一次pH，延长振荡时间10 min。

4、将振荡液转移至离心管，如体枳较大，可使用2根离心管。10000 r/min，4℃，离心30 min。取上清至干净试管或三角瓶，用1 mol/L HCl调pH至7.0。

5、加入0.25倍体积 5XPEG/NaCl溶液，使终溶液浓度为100 g/L PEG，0.3 mol/L NaCl。60 s摇匀，4℃，60 次/min，振荡60 min。10000 r/min，4℃，离心 30 min，弃上清。高速冷冻离心机10000 r/min，4℃，离心5 min，紧实沉淀，弃上清。

6、500 μL PBS悬浮沉淀。如食品样品为生食蔬菜，可直接将悬浮液转移至干净试管，测定并记录悬浮液毫升数，用于后续RNA提取。

如食品样品为软质水果，将悬浮液转移至耐氯仿试管中。加入500 μL氯仿/丁醇混合液，涡旋混匀，室温静置5 min。高速冷冻离心机10000 r/min，4℃，离心 15 min，将液相部分仔细转移至干净试管，测定并记录悬浮液毫升数，用于后续RNA提取。

按照常规的提取软质水果和生食蔬菜的病毒，整个实验过程需要，至少使用离心机 3 次以上……